各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理局：

　　為加強(qiáng)SARS診斷試劑、疫苗以及防治藥物篩選研發(fā)工作的管理，規(guī)范技術(shù)研究及實(shí)驗(yàn)方法，確保研究結(jié)果真實(shí)可靠，我局組織制定了《SARS病毒滅活疫苗臨床前研究技術(shù)要點(diǎn)》、《細(xì)胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗(yàn)技術(shù)要求》、《SARS診斷試劑生產(chǎn)研制技術(shù)要求》及《SARS病毒毒株資料登記表》等技術(shù)要求，現(xiàn)予印發(fā)，請從事SARS防治藥物研發(fā)的單位遵照執(zhí)行，并就相關(guān)問題通知如下：

　　一、從事SARS疫苗研究、診斷試劑研制和有關(guān)藥物篩選等工作的單位，在執(zhí)行相關(guān)技術(shù)要求的同時，必須嚴(yán)格按照科學(xué)技術(shù)部、衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家環(huán)境保護(hù)總局四部局聯(lián)合頒發(fā)的《關(guān)于印發(fā)〈傳染性非典型肺炎病毒實(shí)驗(yàn)室暫行管理辦法〉和〈傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動物模型的暫行管理辦法〉的通知》（國科發(fā)農(nóng)社字〔2003〕129號）要求保存和使用SARS病毒毒株，任何單位不得擅自進(jìn)行毒株的轉(zhuǎn)讓。因SARS 病
毒毒株保存或者使用不當(dāng)引起嚴(yán)重后果者，將承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。

　　二、各藥物研究開發(fā)單位應(yīng)按照《SARS病毒毒株資料登記表》的要求整理有關(guān)毒株的詳細(xì)資料，于2003年7月31日前報中國藥品生物制品檢定所（北京天壇西里2號，郵編100050；聯(lián)系人：董關(guān)木；聯(lián)系電話：010-67058428）。未按規(guī)定要求提交SARS病毒毒株資料的，國家食品藥品監(jiān)督管理局將不受理其研發(fā)制品的注冊申報和審批。

　　三、中國藥品生物制品檢定所接到各單位報送的SARS病毒毒株資料后，應(yīng)及時審核并將審核意見和進(jìn)行藥物研究用毒種的基本情況，書面報國家食品藥品監(jiān)督管理局。

　　四、請各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理局盡快將本通知轉(zhuǎn)發(fā)至轄區(qū)內(nèi)從事SARS防治藥物研究開發(fā)單位。

　　特此通知


　　附件：1．SARS病毒滅活疫苗臨床前研究技術(shù)要點(diǎn)
　　　　　2．細(xì)胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗(yàn)技術(shù)要求
　　　　　3．SARS診斷試劑生產(chǎn)研制技術(shù)要求
　　　　　4．SARS病毒毒株資料登記表


　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　國家食品藥品監(jiān)督管理局
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二○○三年七月一日

附件1：

　　　　　　　　　　　　SARS病毒滅活疫苗臨床前研究技術(shù)要點(diǎn)

　　隨著對非典型肺炎的病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷和治療等學(xué)科進(jìn)行全面深入的研究，在各領(lǐng)域已取得重要進(jìn)展，尤其是確定了SARS病毒為其病原體，已成功分離到多株SARS病毒，并已驗(yàn)證其能在Vero細(xì)胞和2BS等細(xì)胞系中培養(yǎng)增殖，這為研制疫苗提供了基礎(chǔ)和基本條件。但是由于SARS病毒的研究有待進(jìn)一步深入，疫苗的研制尚存在很多的不確定因素。為使SARS病毒滅活疫苗的臨床前研究工作科學(xué)規(guī)范，特制定SARS病毒滅活疫苗臨床前研究考慮要點(diǎn)。

　　一、毒種
　　研究本疫苗所用的毒種須證明為SARS病毒，如該毒種分離自人體，須提供以下資料

（一）病毒株名稱及來源
　　1．名稱
　　2．宿主情況：
　　（1）病人姓名、年齡、性別、民族、家庭住址；
　?。?）發(fā)病地點(diǎn)、發(fā)病日期；
　　（3）收住入院日期、臨床確診日期、實(shí)驗(yàn)室確診日期；
　?。?）病人病程及病人轉(zhuǎn)歸：死亡、痊愈、是否有后遺癥；
　　（5）毒株分離原樣本：
　　咽試子、漱口液、痰液、血液、糞便或尸解標(biāo)本組織名稱；
　?。?）取樣日期；
　　（7）取樣時病人的病期；
　?。?）取樣地點(diǎn)；
　　（9）病人是否留有恢復(fù)期血清；
　　如有：采血日期（病期）和血清量；
　　鑒于人類咽試子、漱口液、痰液、糞便等樣品難免污染其他外原因子，因此建議盡可能采用病人血液分離的病毒株。

　　（二）毒株分離過程
　　1．用細(xì)胞分離病毒，須提供所用細(xì)胞名稱、代次、來源和細(xì)胞無菌檢測、外原因子檢測等資料；鑒于Vero E6細(xì)胞的生物學(xué)特性，用Vero E6細(xì)胞分離的SARS病毒不能直接用于疫苗生產(chǎn)用毒種，須將Vero E6細(xì)胞的適應(yīng)株重新轉(zhuǎn)適應(yīng)到Vero細(xì)胞或二倍體細(xì)胞株的毒種方能用于生產(chǎn)，因此建議盡可能使用直接以Vero細(xì)胞或二倍體細(xì)胞株分離的毒種。
　　2．通過動物分離病毒，須提供所用動物名稱、動物品系、動物級別、動物年齡和制備毒種的動物臟器名稱等資料；如再適應(yīng)到細(xì)胞，則還須提供1．項中的6所述的細(xì)胞資料。

　　（三）病毒分離傳代特性
　　樣品處理方法、首次盲傳確證病毒陽性代次、病毒確證檢定方法、每代培養(yǎng)天數(shù)、病毒滴度、滴定方法、動物是否發(fā)病或死亡等資料。

　?。ㄋ模┒痉N建立和保存
　　原始毒種代次、毒種病毒滴度、毒種添加的保護(hù)劑的名稱和濃度、毒種存儲條件。
　　毒種批的建立應(yīng)按《中國生物制品規(guī)程》疫苗毒種要求進(jìn)行，應(yīng)建立原始毒種、主毒種和工作毒種批三級毒種庫，主種子和工作種子批還須有毒種的限定代次的資料，以證明主種子和工作種子批在規(guī)定代次內(nèi)的生物學(xué)特性與原始毒種一致。

　?。ㄎ澹┒痉N的檢定
　　1．毒種的鑒別試驗(yàn)：
　　應(yīng)提供檢定方法、檢定日期、檢定結(jié)果等資料，建議采用下述方法進(jìn)行鑒別試驗(yàn)：
　?。?）可使用確診為SARS病人的恢復(fù)期高效價血清中和病毒。
　?。?）測定中和前后的病毒滴度。
　?。?）應(yīng)有病毒株的核酸全序列分析的資料，包括序列測定的方案、測定方法和測定結(jié)果，測定結(jié)果應(yīng)附核酸序列圖、推導(dǎo)的氨基酸序列圖、種系發(fā)生樹圖等以進(jìn)一步證明為SARS冠狀病毒。

　　2．毒種的無菌試驗(yàn)
　　應(yīng)根據(jù)《中國生物制品規(guī)程》疫苗生產(chǎn)用毒種的要求進(jìn)行無菌試驗(yàn)檢查。

　　3．毒種的外源因子檢查
　　應(yīng)用證明為SARS病毒感染的單人份病人血清中和本病毒。完全中和病毒后（如不能一次中和，可用另一病人血清再一次中和后）按下列方法進(jìn)行動物和細(xì)胞檢查。
　?。?）動物試驗(yàn)法
　　小鼠
　　取15-20g小鼠至少10只，用經(jīng)中和后的病毒懸液，每只腦內(nèi)接種0．03ml，腹腔接種0．5ml。至少觀察21天。解剖所有在試驗(yàn)24小時后死亡或有患病體征的小鼠，為了檢查病毒感染的證據(jù)，直接肉眼觀察其病理改變，并將有病變的相應(yīng)的組織懸液通過腦內(nèi)和腹腔接種另外至少5只小鼠并觀察21天。如果沒有小鼠表現(xiàn)出病毒感染現(xiàn)象，則病毒種子符合要求。在觀察期內(nèi)至少有80%最初接種的小鼠存活試驗(yàn)才有效。
　　乳鼠
　　出生后24小時以內(nèi)的乳鼠，至少10只，用經(jīng)中和后的病毒懸液，腦內(nèi)接種0．01ml，腹腔接種至少0．1ml。每天觀察，至少14天。解剖所有在試驗(yàn)24小時后死亡或有患病體征的小鼠，直接肉眼觀察其病理改變，并取有病變的相應(yīng)的組織和腦、脾制備成懸液腦內(nèi)和腹腔接種另外至少5只小鼠并每天觀察，觀察14天。如果沒有小鼠表現(xiàn)出有病毒感染現(xiàn)象，該病毒種子通過試驗(yàn)。在觀察期內(nèi)至少有80%最初接種的小鼠存活試驗(yàn)才有效。
　?。?）細(xì)胞培養(yǎng)法
　　·非血吸附病毒檢查
　　中和后的病毒懸液，還應(yīng)分別接種于人源、猴源和生產(chǎn)用的同種不同批的細(xì)胞。如果是利用人二倍體細(xì)胞生產(chǎn)的，還應(yīng)接種另外一株人二倍體細(xì)胞。每種細(xì)胞最少接種6瓶，每瓶病毒懸液接種量不少于培養(yǎng)液總量的25%。于36±1℃培養(yǎng)，觀察二周，或最后一次收獲病毒液時間檢查是否有CPE出現(xiàn)。未見CPE為陰性。
　　·血吸附病毒檢查
　　于第6-8天和第14天，每種細(xì)胞分別各取出2瓶進(jìn)行血吸附，一瓶放置2-8℃，一瓶放置20-25℃，30分鐘后顯微鏡下觀察，未見血球吸附現(xiàn)象為陰性。
　　特別注意：鑒于我國實(shí)驗(yàn)室條件和所用細(xì)胞的不確定因素，用于分離病毒的細(xì)胞常常污染支原體，而細(xì)胞和病毒一旦污染支原體很難清除，為此，提醒對使用的毒種須高度重視，徹底查清毒種是否確已污染支原體，以免所選毒種不符合生產(chǎn)疫苗用毒種，浪費(fèi)人力、物力、時間和資源。

　　4．毒種的病毒滴度
　　鑒于目前的研究資料顯示，SARS病毒在Vero細(xì)胞中的復(fù)制滴度一般可達(dá)108，在二倍體細(xì)胞中為106左右，用于疫苗研究的毒種應(yīng)分別達(dá)到上述要求。

　　5．毒種免疫原性檢查
　　鑒于目前尚無測定疫苗免疫原性的有效方法和標(biāo)準(zhǔn)，建議以實(shí)驗(yàn)性滅活疫苗（即用已建立的毒種庫制備的滅活病毒液）單次或多次免疫動物后采血清測定中和抗體滴度，測定方法應(yīng)為蝕斑形成減少法或細(xì)胞病變抑制法，可能時應(yīng)對所測抗體的種類進(jìn)行分析。用于中和抗體測定的病毒株應(yīng)為非同源株，免疫用動物可考慮家兔、小鼠、豚鼠或其他敏感動物。如有條件時也可測定疫苗的ED50

　　6．疫苗候選株病毒的純化問題
　　新分離的病毒往往是群體病毒毒種，難免存在不同特性的病毒，如毒種病毒滴度和免疫原性未達(dá)要求，必要時可考慮用終末稀釋法或蝕斑形成法挑斑反復(fù)多次純化。滅活疫苗的研制，如毒種病毒滴度和免疫原性能達(dá)到基本要求，可用現(xiàn)有毒種直接制備實(shí)驗(yàn)性疫苗，無須純化。

　　7．毒種的其他檢定
　　按《中國生物制品規(guī)程》疫苗生產(chǎn)用毒種的要求進(jìn)行

　　二、疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞
　　鑒于目前SARS病毒對各種細(xì)胞的敏感性研究，以Vero E6細(xì)胞最好，Vero細(xì)胞和二倍體細(xì)胞次之。但Vero E6細(xì)胞不能用于生產(chǎn)，可選擇Vero細(xì)胞、和/或二倍體細(xì)胞進(jìn)行研究。

　　Vero細(xì)胞、二倍體細(xì)胞均為傳代細(xì)胞，因此須建立三級細(xì)胞庫。這兩種細(xì)胞建立細(xì)胞庫和各細(xì)胞庫的各項檢定應(yīng)按《中國生物制品規(guī)程》“生物制品生產(chǎn)用動物細(xì)胞制備及檢定規(guī)程”項下的相應(yīng)要求進(jìn)行。

　　Vero細(xì)胞是由非洲綠猴腎建立的傳代細(xì)胞系，至170代以后已有明顯的致瘤性，一般使用的疫苗生產(chǎn)終末安全代次為160代以前，建議使用Vero細(xì)胞研制疫苗的機(jī)構(gòu)應(yīng)注意該細(xì)胞的資料。

　　三、生產(chǎn)工藝研究
　?。ㄒ唬┮呙缭荷a(chǎn)工藝的研究
　　1．生產(chǎn)工藝的主要技術(shù)參數(shù)
　　（1）病毒與細(xì)胞的接種比例，MOI的最佳參數(shù)。
　　（2）細(xì)胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)的最佳溫度、培養(yǎng)時間和收獲時間。
　?。?）病毒液的收獲
　　鑒于Vero作培養(yǎng)基質(zhì)時，后續(xù)純化工藝去除細(xì)胞DNA時的困難，因此建議不作細(xì)胞凍化以提高病毒收獲的做法。
　?。?）滅活或裂解條件及滅活效果的驗(yàn)證
　　鑒于SARS病毒的強(qiáng)感染和強(qiáng)傳播特性，滅活劑的選擇和滅活效果的驗(yàn)證尤為重要，建議如下：

　　·滅活劑
　　根據(jù)其他疫苗的滅活經(jīng)驗(yàn)，一般情況下可采用甲醛、β-丙內(nèi)酯或其他有效的滅活劑，如選擇甲醛，其濃度、滅活的作用時間、作用溫度、pH等條件對疫苗的抗原的活性具有較大的影
響，在研究中應(yīng)引起注意；
　　如用β-丙內(nèi)酯應(yīng)使用95%以上濃度的新試劑，β-丙內(nèi)酯保存時間過長引起自身聚合，影響滅活效果。β-丙內(nèi)酯由于能在疫苗液體中完全水解，不必考慮在成品疫苗中的殘留，因此可考慮在純化前低劑量預(yù)滅活一次，提高生產(chǎn)工序時的安全性，在純化后再滅活一次以確保完全滅活。

　　·滅活效果的驗(yàn)證
　　提供病毒滅活驗(yàn)證的詳細(xì)資料?？刹捎妹舾屑?xì)胞Vero E6盲傳3代，每代用直接免疫熒光驗(yàn)證無活病毒。
　?。?）病毒液的濃縮和/或活性抗原的提取純化，可考慮用膜過濾法濃縮和柱層析法或區(qū)帶離心法純化或其他有效方法。建議參照其他純化疫苗的要求，對疫苗的總蛋白含量進(jìn)行控制。
　?。?）佐劑
　　目前能用于疫苗的佐劑僅為鋁佐劑，而鋁佐劑通常使疫苗產(chǎn)生的抗體滯后，且增加注射局部的副反應(yīng)機(jī)率。如疫苗的抗原量能滿足免疫的需要，建議不加佐劑。

　　2．滅活疫苗的安全性（免疫感染增強(qiáng)作用）
　　鑒于呼吸道病毒感染的疫苗預(yù)防（麻疹病毒、呼吸道合胞病毒等）易產(chǎn)生滅活疫苗導(dǎo)致免疫感染增強(qiáng)的病理反應(yīng)，因此，本滅活疫苗須排除免疫感染增強(qiáng)作用的潛在危險，為本滅活疫苗的研究、實(shí)驗(yàn)和今后的安全使用提供依據(jù)。

　　但是目前沒有明確的實(shí)驗(yàn)動物模型可以驗(yàn)證有無免疫感染增強(qiáng)作用，為此建議： 可用猴體接種滅活疫苗后再攻擊SARS病毒，一定時間后測定猴體是否產(chǎn)生病毒血癥、臟器是否減少或無病毒抗原、以及作組織病理學(xué)和免疫病理學(xué)等檢查，可以得到初步的證據(jù)。另外也可考慮用家兔、小鼠等別的動物進(jìn)行免疫感染增強(qiáng)作用的初步驗(yàn)證。

　　四、生產(chǎn)的安全性問題
　　鑒于SARS病毒的強(qiáng)傳播和強(qiáng)感染性的生物學(xué)特性，生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴(yán)格按活病毒和滅活后兩部分分開進(jìn)行，活病毒操作區(qū)必須在P3以上生物安全條件下進(jìn)行，嚴(yán)格執(zhí)行國家的有關(guān)規(guī)定。

　　五、其他
　　1．按我國《藥品注冊管理辦法》中預(yù)防用生物制品的技術(shù)要求完成相關(guān)的研究。
　　2．本技術(shù)要點(diǎn)將根據(jù)對SARS研究的進(jìn)展情況適時進(jìn)行修訂。


附件2：
　　　　　　　　　細(xì)胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗(yàn)技術(shù)要求

　　新近發(fā)現(xiàn)的非典型肺炎的病原SARS病毒，目前尚沒有理想的動物模型可用于對抗SARS病毒藥物的篩選。為此用細(xì)胞模型篩選研究抗SARS病毒的藥物，對評價藥物抗病毒活性或效果具有重要提示價值。為規(guī)范細(xì)胞模型抗SARS病毒藥物的篩選研究，制定本技術(shù)要求。

　　本技術(shù)要求適用于化藥、中藥、生物制品等擬用于SARS治療或預(yù)防藥物（不包括預(yù)防用疫苗），并將根據(jù)SARS病毒學(xué)研究的進(jìn)展適時修訂。

　　一、試驗(yàn)材料要求
　?。ㄒ唬┎《?br/>　　1．毒株：應(yīng)采用SARS流行期臨床分離且經(jīng)相關(guān)部門確證的SARS病毒毒株（建議選用2-3株）。
　　2．毒種庫：試驗(yàn)前將病毒先在敏感細(xì)胞上傳數(shù)代，增加毒力，待毒力穩(wěn)定后，收獲病毒分裝一定數(shù)量的小管，在-80℃低溫冰箱或液氮冷凍保存?zhèn)溆谩?br/>　　3．檢定：毒種庫毒種須經(jīng)外源因子檢測合格后方可用于篩選試驗(yàn)，每次試驗(yàn)取一支，不得回凍再用于篩選。

　　（二）細(xì)胞
　　1．細(xì)胞株：選用對SARS病毒敏感的傳代細(xì)胞株，如Vero E6、2BS細(xì)胞等。
　　2．細(xì)胞庫：收集大量培養(yǎng)的細(xì)胞分管液氮凍存以保留足夠的
傳代細(xì)胞。試驗(yàn)前先復(fù)蘇細(xì)胞傳數(shù)代，使培養(yǎng)細(xì)胞生長旺盛穩(wěn)定后，
開始接種細(xì)胞培養(yǎng)板進(jìn)行試驗(yàn)。
　　3．檢定：細(xì)胞庫細(xì)胞須經(jīng)外源因子檢測合格后方可用于篩選試驗(yàn)，每次試驗(yàn)取一支，不得回凍再用于篩選。

　?。ㄈ┐郎y藥物
　　試驗(yàn)前編號登記、標(biāo)明藥名、來源、批號、重量或體積、溶媒、溶解度、穩(wěn)定性和保存條件等。

　?。ㄋ模┢渌?br/>　　本試驗(yàn)研究必須在生物安全3級試驗(yàn)室進(jìn)行，毒種的管理使用必須符合國家的有關(guān)規(guī)定。

　　二、篩選試驗(yàn)
　　（一）預(yù)備試驗(yàn)
　　1．病毒毒力測定
　　選擇敏感細(xì)胞用于病毒培養(yǎng)，加入10倍系列稀釋的5-7個濃度的病毒培養(yǎng)液。適宜條件下培養(yǎng)后每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞病變（CPE）或用MTT染色法觀察細(xì)胞存活狀態(tài)，用Reed-Muench法計算病毒半數(shù)感染劑量（TCID50），每濃度設(shè)4個復(fù)孔，重復(fù)實(shí)驗(yàn)確定毒力。
　　2．藥物對細(xì)胞毒性的測定
　　以細(xì)胞病變或MTT染色法為觀察指標(biāo)，前法可觀察3-5天，每個藥物至少設(shè)4個濃度進(jìn)行測定，用Reed-Muench法求出對細(xì)胞無毒的最大濃度（TD0）和半數(shù)中毒濃度（TD50）。每濃度藥液至少3管，重復(fù)試驗(yàn)3次。

　?。ǘ┖Y選試驗(yàn)
　　經(jīng)預(yù)試驗(yàn)求出病毒的TCID50和藥物的TD0后，在SARS病毒的敏感細(xì)胞模型上進(jìn)行抗病毒活性篩選，適宜的培養(yǎng)液及培養(yǎng)條件培養(yǎng)。96孔板，細(xì)胞長成單層后，每孔加100μl （100 TCID50左右）病毒感染，吸附2小時后，傾出病毒。然后加入待測藥物，只做一個最大無毒濃度（TD0），4個孔。試驗(yàn)設(shè)病毒對照、細(xì)胞對照及陽性藥物對照。以病毒對照孔出現(xiàn)病變達(dá)75%以上（即4+時），可終止試驗(yàn)。
　　倒置顯微鏡觀察對細(xì)胞的致病變作用（CPE），將給藥孔與病毒對照孔進(jìn)行比較，如最大無毒濃度藥物無抑制病毒CPE作用則不繼續(xù)做，如有抑制作用須進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)。

　?。ㄈ┭a(bǔ)充試驗(yàn)
　　最大無毒濃度（TD0）的藥物如有抗病毒作用，應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)充篩選試驗(yàn)。模型和培養(yǎng)條件同上。
　　試驗(yàn)設(shè)藥物試驗(yàn)組、病毒對照組及細(xì)胞對照組。每孔加入100TCID50左右病毒感染，吸附2小時，傾出病毒。選用最大無毒濃度（TD0）藥液，2倍或者10倍系列稀釋的5-7個濃度，每濃度4孔，每孔100μl，分別加入未感染或感染的細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)，每天用倒置顯微鏡觀察，記錄細(xì)胞病變程度。當(dāng)病毒對照病孔病變達(dá)4+時可終止試驗(yàn)，判定藥物的效果。試驗(yàn)須重復(fù)3次。
　　用CPE法，對各組進(jìn)行比較。
　　用Reed-Muench法計算半數(shù)有效濃度（IC50）及治療指數(shù)（TI）。
　　TI = 半數(shù)中毒濃度（TD50）/半數(shù)有效濃度（IC50）
　　以上初篩及進(jìn)一步藥效評價方法一般是針對治療性給藥（病毒感染細(xì)胞后給藥）的藥物；若為預(yù)防性藥物，則建議相應(yīng)調(diào)整給藥與感染的順序（病毒感染前給藥，病毒感染時及感染后均應(yīng)洗去藥物），以考察其預(yù)防效果。

　　四、結(jié)果評價
　　鑒于目前SARS疾病的理想動物模型尚未建立，且體內(nèi)外藥效學(xué)結(jié)果的相關(guān)性尚不明確，體外藥效學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果僅是評價藥物療效重要參考指標(biāo)。在這種情況下,盡量提供更多的反映藥物體內(nèi)外相關(guān)性的研究資料將有助于進(jìn)一步的評價;如在可能的情況下,進(jìn)行藥代動力學(xué)研究,考察體內(nèi)藥物濃度能否達(dá)到IC50及維持時間等。另外，還應(yīng)結(jié)合受試藥物的安全性，對其有效性進(jìn)行綜合評價。


附件3：
　　　　　　　　　　　　SARS診斷試劑生產(chǎn)研制技術(shù)要求

　　由于對引發(fā)嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥（簡稱SARS）的病原－新型冠狀病毒的研究尚有待進(jìn)一步深入，診斷試劑的研究仍存在很多不確定因素。為規(guī)范SARS診斷試劑的研究，特制訂本技術(shù)要求。

　　一、基本要求
　　（一）從事SARS體外生物診斷試劑研發(fā)的機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)具有與試驗(yàn)研究項目相適應(yīng)的人員、場地及設(shè)施等條件。
　?。ǘ㏒ARS病毒的分離、管理、使用及其保藏、運(yùn)輸、處理等必須按照國家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。
　?。ㄈ┡R床研究必須符合GCP的原則及相關(guān)的技術(shù)要求。

　　二、原材料
　?。ㄒ唬┛贵w檢測試劑
　　1．抗原：由于對新型冠狀病毒的基礎(chǔ)研究尚有待深入，為此所用抗原應(yīng)盡可能選擇檢測譜廣的抗原，如純化的全病毒抗原。
　　2．抗原來源明確，質(zhì)量指標(biāo)必須達(dá)到診斷試劑研制用的
要求。
　　3．病毒株須經(jīng)鑒定并確證。
　　4．其他輔助材料必須符合相關(guān)的技術(shù)要求。
　　5．包被用全病毒抗原或陽性質(zhì)控血清須進(jìn)行滅活驗(yàn)證研究。
　　6．陽性質(zhì)控血清須進(jìn)行中和試驗(yàn)驗(yàn)證研究。

　　（二）核酸檢測試劑
　　1．引物的設(shè)計須符合核酸檢測設(shè)計的要求。
　　2．靶序列需進(jìn)行與其他病毒同源性的分析對比研究。
　　3．檢測試劑須設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)。
　　4．試劑須設(shè)置抗污染的特定措施。
　　5．?dāng)U增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。

　?。ㄈ┛乖瓩z測試劑
　　1．可采用單克隆或者多克隆抗體的雙抗體檢測法。
　　2．抗體須經(jīng)特異性交叉反應(yīng)測定。

　　三、工藝與生產(chǎn)
　?。ㄒ唬┕に囘^程須進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)研究。
　?。ǘ┥a(chǎn)人員須經(jīng)專業(yè)知識培訓(xùn)，了解有關(guān)SARS的基本知識。
　　（三）生產(chǎn)車間須符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。

　　四、質(zhì)量控制
　?。ㄒ唬?yīng)制定嚴(yán)格的原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，保證批與批間的一致性。
　?。ǘ?yīng)研究制定企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及參考品，用于對試劑的質(zhì)量控制。
　　（三）試劑盒須進(jìn)行成品性能的評價。

　　五、臨床研究
　　（一）研究用樣品必須有明確、詳細(xì)的臨床資料，包括病程等；樣品中須有一定數(shù)量的陽轉(zhuǎn)系列標(biāo)本。
　?。ǘ╉毥?jīng)過至少兩家臨床研究單位進(jìn)行臨床考核，出具臨床考核報告并加蓋臨床考核單位有效公章。
　　（三）研究用試劑須經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定合格后方可用于臨床研究。
　?。ㄋ模z測時應(yīng)采用雙盲或者單盲，陰性樣品和陽性樣品須在符合相關(guān)規(guī)定的檢測實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際評價條件下同時進(jìn)行測定。
　　（五）核酸檢測試劑標(biāo)本如血清或者唾液等，陽性數(shù)量分別不少于200份，同一類型陰性樣品不少于400份。
　?。γ嘎?lián)免疫診斷試劑，不同類型的陽性、陰性樣品均不少于400份。
　　（七）其他方法的SARS診斷試劑，不同類型的陽性、陰性樣品的數(shù)量均不得少于300份。
　　（八）檢測數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析，以病程10天劃分，不同病程的病例（樣本）數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　六、其他
　?。ㄒ唬㏒ARS診斷試劑的生產(chǎn)研制必須符合《中華人民共和國傳染病防治法》的相關(guān)要求。
　?。ǘ┊a(chǎn)品使用說明書需明確標(biāo)注試劑檢測的局限性。
　　（三）本技術(shù)要求將根據(jù)對SARS研究的進(jìn)展情況適時進(jìn)行修訂。


附件4：
　　　　　　　　　　　　　　　SARS病毒毒株資料登記表

一、病毒株名稱：
二、宿主情況：
　- 病人姓名
　- 病人年齡
　- 病人性別
　- 病人民族
　- 病人家庭住址
　- 發(fā)病地點(diǎn)
　- 發(fā)病日期
　- 收住入院日期
　- 臨床確診日期
　- 實(shí)驗(yàn)室確診日期
　- 病人病程
　- 病人轉(zhuǎn)歸　　　　　死亡　　　痊愈　　　是否有后遺癥
　- 病人密切接觸者病人數(shù)
　- 毒株分離原樣本：
咽試子　　漱口液　　　痰液　　　血液　　　糞便　　　尸解標(biāo)本的組織名稱
　- 取樣日期
　- 取樣時病人的病期
　- 取樣地點(diǎn)
　- 病人是否留有恢復(fù)期血清
如有：采血日期
　　　　　血清量　　　　ml　　　　支
三、毒株分離過程
分離用細(xì)胞
　　細(xì)胞名稱
　　細(xì)胞代次
　　細(xì)胞來源
　　培養(yǎng)基名稱
分離用動物
　　動物名稱
　　動物品系
　　動物年齡
　　飼養(yǎng)條件
病毒分離傳代
　　樣品處理方法
　　首次盲傳確證病毒陽性代次
　　病毒確證檢定方法
　　每代培養(yǎng)天數(shù)
　　細(xì)胞是否產(chǎn)生病變
　　　　病變模式（如有請?zhí)峁┱掌?br/>　　病毒滴度
　　滴定方法
四、毒種建立和保存
毒種存儲條件　　　-20℃　　　-40℃ 　　　-60℃　　　-80℃
原始毒種代次
分裝毒種用容器名稱
分裝毒種用容器材料
分裝毒種用容器體積
毒種病毒滴度
毒種添加的保護(hù)劑
　　人白蛋白　　%
　　牛血清　　　%
　　其他保護(hù)劑
原始毒種批數(shù)量　　　ml　　　支
該株毒種的其他代次
　　數(shù)量　　　ml　　　支
如已凍干
　　寫明凍干條件
五、毒種的檢定
　　毒種的鑒別實(shí)驗(yàn)
　　檢定方法
　　檢定日期
　　檢定結(jié)果
毒種的無菌試驗(yàn)
　　檢定方法
　　檢定日期
　　檢定結(jié)果
　　毒種的序列測定
　　測定方案
　　測定方法
　　測定日期
　　實(shí)驗(yàn)室名稱
　　測定結(jié)果　　附：核酸序列圖
　　　　　　　　　　推導(dǎo)的氨基酸序列圖?
　　　　　　　　　　種系發(fā)生樹圖
六、分離病毒的P3實(shí)驗(yàn)室
面積
所在地址
郵政編碼
電話
傳真
實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人姓名　　　　職稱　　　　　職務(wù)
E-mail：
手機(jī)
上級主管部門
負(fù)責(zé)人（簽章）