各直屬檢驗檢疫局：

　　最近，英國食品標準署連續(xù)公布了在部分食品中發(fā)現違規(guī)添加染料對位紅。對位紅是一種常用于工業(yè)生產的紅色顏料，也稱對硝基苯胺紅，化學成分類似于蘇丹紅1號，對人類的眼睛、皮膚和呼吸系統有刺激作用，我國禁止應用于食品加工生產。

　　為保護消費者健康，防止含對位紅食品進入市場，各局自即日開始，要對進出口食品中可能使用紅色染料的產品同時進行蘇丹紅和對位紅的檢測，一旦發(fā)現立刻封存，并將情況上報總局。

　　北京檢驗檢疫局已經參考歐盟0399標準開展對位紅項目的檢測，現將其對位紅檢測方法印發(fā)給你們，供開展對位紅檢測時參考使用。如有檢測技術方面的疑問，可直接與北京局聯系解決。

　　附件1：

食品中對位紅的檢測——高效液相色譜法（初步方案）（北京出入境檢驗檢疫局食品安全檢測中心提供）

　　1 應用范圍

　　本方法涉及以辣椒為主要或配料成分的食品和以番茄原料為基質的食品中違禁著色劑對位紅的檢測。

　　2 定義

　　對位紅又稱對硝基苯胺紅，是一種工業(yè)用偶氮染料，不溶于水易溶于有機溶劑，不允許在食品中使用。

　　3 方法要點

　　對位紅染料經乙腈超聲提取后，過濾，濾液用反相高效液相色譜儀進行色譜分析。以波長可變的紫外—可見檢測器定性和定量。

　　4 試劑與標準品

　　除有特殊指明外，本方法中涉及試劑均為分析純，實驗用水均為超純水。

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　　│　試劑與標準品名稱　│　　規(guī)格　　│　 級別　 │
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│乙腈　　　　　　　　│4L／瓶　　　│HPLC級　　│
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│二氯甲烷　　　　　　│4L／瓶　　　│HPLC級　　│
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│冰醋酸　　　　　　　│500ml／瓶　 │分析純　　│
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│對位紅　　　　　　　│　　　　　　│　　　　　│
　　└──────────┴──────┴─────┘

　　5　標準溶液

　　5.1　標準貯備液

　　稱取20.0mg對位紅（按產品標明的純度折算成純著色劑），用乙腈溶解并定容至100ml容量瓶。

　　5.2　標準工作液

　　分別取上述標準貯備液50μl、100μl、200μl、500μl和1000μl溶液移入100ml容量瓶中以乙腈定容，此時溶液中對位紅的濃度分別為0.1，0.2，0.4，1.0和2.0μg／ml.

　　6 儀器與設備

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　　│　　　 前處理儀器與設備　　　　　 │　分析儀器與設備　│
　　├─────────────────┼─────────┤
　　│萬分之一天平　　　　25ml具塞比色管│　　　　　　　　　│
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│　　　　　　　　　│
　　│電子天平　　　　　　250ml燒杯　　 │配有紫外—可見檢測│
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│器及自動進樣器的反│
　　│打漿機　　　　　　　100ml容量瓶　 │向HPLC　　　　　　│
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│　　　　　　　　　│
　　│超聲波震蕩提取儀　　0．45μm濾膜　│CLOVERSIL-C18　　 │
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│色譜柱4．6×250mm │
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│5μm　　　　　　　│
　　│5ml一次性注射器　　　　　　　　　 │　　　　　　　　　│
　　│漩渦振蕩器　　　　　　　　　　　　│　　　　　　　　　│
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　　7　樣品處理方法

　　7.1　甜椒或紅辣椒粉

　　稱取10g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.2　粉狀調味品

　　稱取5g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.3　調味辣椒醬、原味辣椒醬、辣椒油等

　　稱取5g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.4　以番茄原料為基質的番茄醬和番茄沙司

　　稱取10g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.5　提取

　　將稱量好的樣品在超聲波提取儀中充分超聲提取60分鐘，并不時搖勻。

　　7.6　上樣

　　用5ml一次性注射器抽取一定體積的提取液，將提取液過0.45μm有機系濾膜至進樣瓶中，擰緊瓶蓋，在漩渦振蕩器上振蕩30秒，使溶液充分混勻，待測。

　　8　色譜分析

　　8.1　高效液相色譜測定

　　8.1.1　流動相

　　流動相A：10％乙酸溶液

　　流動相B：乙腈

　　8.1.2　梯度洗脫程序

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　　│時間(Min) │流動相A％ │流動相B％ │梯度曲線│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│0　　　　 │20　　　　│80　　　　│線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│5　　　　 │20　　　　│80　　　　│線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│7　　　　 │0　　　　 │100　　　 │線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│25　　　　│0　　　　 │100　　　 │線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│26　　　　│20　　　　│80　　　　│線性　　│
　　└─────┴─────┴─────┴────┘

　　8.1.3　流速：1.0ml／min

　　8.1.4　進樣量：20μl

　　8.1.5　檢測波長

　　紫外—可見檢測器或二極管陣列檢測器，485nm檢測。

　　8.1.6　色譜柱

　　CLOVERSIL—C18色譜柱4.6×250mm 5μm　　8.1.7　柱溫：室溫

　　注：待基線穩(wěn)定后開始進樣，兩次進樣間隙時間為10分鐘

　　9　結果計算

　　9.1　標準曲線

　　用5點標準工作溶液的測定值繪制標準曲線，標準溶液濃度在0.1～2.0μg／ml范圍內呈良好線性。（R＞0.995）

　　9.2　樣品結果計算

　　對位紅含量按以下公式計算：

　　R＝C×V×D／M單位：mg／kg

　　C——樣品中待測組分的濃度，單位：μg／ml

　　M——檢測樣品取樣量（g）

　　V——樣品溶液體積（ml）

　　D——樣品溶液的稀釋倍數

　　10　注意事項

　　10.1　對位紅與蘇丹類染料化學結構和性質相類似，使用該色譜條件出峰時間約為5～6分鐘。

　　10.2　使用該方法可同時檢測蘇丹橙G、蘇丹Ⅰ、蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹紅7B、胭脂樹橙等。

　　附件2：

英國食品標準署公布的69種對位紅污染食品名單